BACTH System Kit， EUK001/细菌双杂交系统试剂盒（腺苷酸环化酶）

法国EUROMEDEX公司（www.euromedex.com）产品

 

 

Euromedex 细菌双杂交（BACTH, “细菌腺苷酸环化酶双杂交”）系统是检测和表征体内蛋白质-蛋白质相互作用的一个简单又快速的方法。

 

与需要专业知识的酵母菌双杂交系统相比，BACTH提供与大肠杆菌一起工作的所有优点。

 

易达到的的微生物学和分子生物学技术（质粒制备，转化效率，PCR ...）

 

它利用了来自百日咳杆菌的腺苷酸环化酶的催化结构域（CyaA），由两个互补片段T25 and T18组成的这个事实，当物理分离时不起作用。

 

当这两个片段融合到相互作用的多肽时，X和Y，这些杂交蛋白的异二聚化导致T25和T18片段之间的功能互补，因此导致cAMP合成。

 

通过重构的嵌合酶产生的环AMP与分解代谢激活蛋白CAP结合。 cAMP / CAP复合物是大肠杆菌中基因转录的多效调节剂。 它打开了几个常驻基因的表达，包括参与乳糖和麦芽糖分解代谢的lac和mal操纵子的基因。

 

因此，细菌能够利用乳糖或麦芽糖作为独特的碳源，并且可以在指示剂或选择性培养基上容易地区分。

 

 

 

Components of the kit

BACTH strains

BTH101, LB/DMSO stock (reporter strain for BACTH assay) 1 ml EUB001

DHM1, LB/DMSO stock (reporter strain for BACTH assay) 1 ml EUB002

BACTH vectors

pKNT25, supercoiled, 10 µg (0,5 µg/µl in TE buffer) 20 µl EUP-25N

pKT25, supercoiled, 10 µg (0,5 µg/µl in TE buffer) 20 µl EUP-25C

pUT18, supercoiled, 10 µg (0,5 µg/µl in TE buffer) 20 µl EUP-18N

pUT18C, supercoiled, 10 µg (0,5 µg/µl in TE buffer) 20 µl EUP-18C

Control plasmids

pKT25-zip, supercoiled, 1 µg (0,05 µg/µl in TE buffer) 20 µl EUP-25Z

pUT18C-zip, supercoiled, 1 µg (0,05 µg/µl in TE buffer) 20 µl EUP-18Z

Store at – 20 °C

 

The BACTH system has been developed by the group of Dr. D. Ladant at the Pasteur Institute (Karimova et al., 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95:5752)